當前位置:首頁 >> 技術成果 >> 技術文章
技術成果
技術文章 成果展示

雙熒光素酶報告基因檢測

發布日期:2022-11-11 瀏覽次數:1065

熒光素(Luciferase)是自然界中能夠產生生物發光的酶的統稱,其中螢火蟲熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase 最有代表性。


圖片
目前,雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。
這兩種酶的主要區別:
1. 物種來源不同;
2. 它們的底物和輔因子不同;
3. 發光的顏色不同。
螢火蟲螢光素酶是一種胞內蛋白,從甲蟲(Photinus pyralis)中分離得到,大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下,催化底物螢火蟲螢光素氧化,生成氧化螢光素,并發出黃綠色光,其最強發光波長為560nm。
海腎螢光素酶也是一種胞內蛋白,從海腎(Renilla reniformis)中分離,大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素,氧化生成高能產物coelenteramide,并發出藍光,其最強發光波長為465nm。
因此,正是由于這兩種酶的底物和發光顏色不同,所以在雙報告實驗中得到廣泛應用。研究者利用熒光素酶開發出一套極其靈敏且使用方便的基因報告系統。

雙熒光素酶報告基因檢測優勢
單報告基因實驗往往會受到各種實驗條件的影響,而雙報告基因則通過共轉染的“對照"作為內參為試驗提供一基準線,從而可以避免細胞活性和轉染效率等外在因素對實驗的影響,使得數據結果更為可信。雙熒光素酶報告基因檢測常用的載體有兩種策略。第一種是兩種熒光素分別位于兩個載體上,第二種是兩種熒光素酶位于同一個載體上。
圖片
目前,這一系統被廣泛用于轉錄因子結合位點與啟動子活性分析、RNA 降解、信號轉導、藥物篩選、動物活體成像等領域。pGL3-Basic 質粒用于轉錄因子結合位點與啟動子活性分析;psiCHECK2 質粒用于 miRNA 與其靶點相關分析。



欧美性受xxxx黑人猛交,综合图片亚洲网友自拍,国产微拍一区二区三区四区,亚洲一区二区三区免费视频