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SD大鼠牙髓干細胞原代分離培養方法

發布日期:2022-11-09 瀏覽次數:931

1. 處死動物,分離下頜骨,自中縫處將其分為兩半。

2. 打開髓腔,取出牙髓,去除頂端的apical button,在培養皿中用顯微剪剪碎,注意冰上操作。

3. 將牙髓轉入15ml離心管中,終濃度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃,5% CO2條件下消化40min。

4. 加入完全培養基(MEM+10%FBS+1%雙抗)終止消化,4℃,360g離心10min收集沉淀。

5. PBS清洗一遍,離心收集沉淀,完全培養基重懸,過篩后鋪板。


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干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞,它包括胚胎干細胞和成體干細胞。目前已經成功分離培養包括來自骨髓、肌肉、神經、上皮等組織的成體干細胞。牙髓干細胞是位于牙髓組織的一種成體干細胞。2000年,Gornhtos等首先成功地分離培養出人牙髓干細胞,為干細胞的研究開辟了一個新的領域。牙髓干細胞具有同其他成體干細胞相似的生物學特性,具有較強的克隆形成能力,可以分化為牙髓組織中的終末功能細胞并具有一定的橫向分化能力。目前國內外只有人牙髓干細胞培養成功的報道,鼠牙髓干細胞的相關研究國內外還未見報道,而鼠是實驗研究最常用的模型,它具有取材容易、與人同源性較高等優點。


大鼠牙髓干細胞特性

1)組織來源于實驗動物的正常牙組織。

2)細胞鑒定:STRO-1免疫熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式:長梭形,不規則細胞,貼壁培養。




大鼠牙髓干細胞產品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。



溫馨提醒:

1、可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中,備用;細胞*傳代時,可以將該培養基按照一定比例和客戶自備的培養基混合使用,讓細胞逐漸適應培養條件。

2、確認細胞狀態良好后,應及時將部分細胞凍存,再進行后續的實驗,避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失,影響后續實驗。


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